一.凝胶成像系统的光源有哪几种,各有什么用途?
凝胶成像系统的光源分为四种,分别是透射紫外,反射紫外,透射白光,反射白光。
1.透射紫外:可激发多种荧光染料。光源波长302nm或365nm。
2.反射紫外:紫外反射灯源使用并不广泛,主要是提供非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像需要而使用。由于比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶,透射光源完全可以满足,因此凝胶成像中通常将紫外反射光源作为选配件不列入标配中。光源波长254nm或365nm。
3.透射白光:用于可见光样品拍摄,例如蛋白样品胶的考马斯亮蓝或银染后的观察。
4.反射白光:用于样品的定位和聚焦。
二.凝胶成像系统中常见的波长有哪几种?
1.紫外透射光源:302nm,365nm
2.紫外反射光源:254nm或365nm
3.镜头滤光片:595nm/590nm,537nm,620nm,460nm
三.常见的核酸和蛋白样品胶如何观察?
核酸琼脂糖凝胶的观察:
常用的染料是溴化乙锭(EB),观察时使用透射紫外光源,激发波长为302nm,镜头滤光片为595nm。
蛋白聚丙烯酰胺凝胶的观察:
常用的染料是考马斯亮蓝(Coomassie Blue)和银染(Silver Stain),观察时使用透射白光光源,镜头滤光片595nm。
补充:凝胶成像系统也可以用于天然产物的TLC紫外检测中。试验中,可以将层析完后的薄层板至于灯箱中,用不同波长检测,然后用相机拍下紫外检测结果,保存至电脑,供下一步实验使用,这在目前还是一个很好很方便的方法。