PNAS：天然免疫受体阻断剂研发进展$ v1 w! r: Y' c& O/ S: o0 N
作者： 来源：创药网 发布者：张荐辕 日期：2015-05-08 $ D9 F' X% D( A* B3 a
TLR是一类I型的跨膜蛋白，可以特异性识别微生物特异性的抗原物质（PAMPs）。TLR-2与TLR-6或TLR-1聚合形成异源二聚体可以分别识别二酰脂多肽或三酰脂多肽。当配体物质与聚合后的TLR1/2以及TLR2/6结合后，会招募下游的接合蛋白MyD88。TLR-2信号的缺陷会导致许多免疫疾病（如脓毒症，动脉粥样硬化，肿瘤扩散等）。目前有许多TLR的抑制剂被开发出来，但是都没有获得批准，因此，要想治疗这一类疾病，就必须对TLR2的信号传递机制做更深入的研究。
TLR以及接合蛋白都含有一个TIR结构域（即Toll/IL-1 resistant）该结构域介导了TLR的相互聚合以及下游的信号传递。基于最近的结构学研究：TLR2的TIR结构域中有一个由beta-链与alpha-螺旋组成的"口袋"状结构（BB loop），这一段多肽由相对保守的脯氨酸与甘氨酸组成。来自马里兰大学免疫系的Stefanie N. Vogel等人希望以这一段区域为靶点设计TLR-2特异性的阻断剂，他们的研究结果发表在最近一期的《PNAS》杂志上。" `3 q, }& D5 ^6 i
首先，作者利用计算机辅助的方法，针对BB loop区删选了所有可能插入的小分子化合物以及已经上市的药物。他们筛选到了1000多种有可能会该区域发生互作的潜在分子，其中有149种小分子化合物以及20种上市药物具有高效的TLR-2信号阻断活性。
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之后，作者将筛选到的化合物进行体外试验。这些药物分别与转染了TLR-2的HEK293细胞进行孵育，随后细胞经过TLR2配体的并检测下游的IL-8的表达。结果显示，第C29号化合物能够有效地抑制配体引起的HEK293细胞IL-18的分泌。随后，作者在人源的单核细胞系THP-1中验证了上述结果。接下来，作者检测了该药物对小鼠的TLR-2信号的阻断效应。结果显示，C29能够有效地抑制TLR-1/2的信号传递，但不能抑制TLR2/6的信号传递。
另外，作者还发现该药物还能够抑制微生物本身引起的TLR2的信号传递。& |1 i+ \: X) l* O- t3 H
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随后，作者通过生化实验发现C29能够抑制TLR-2激活后与下游MyD88的相互作用。并且C29能够抑制MAPK p38以及ERK的磷酸化。, U! {2 O1 g8 m4 s- q3 E# t
那么C29是否是特异性针对BB-loop区的多肽序列呢？作者设计了一系列BB-loop突变试验，不幸的是，这些突变本身就会使得TLR-1/2的信号失活，因此无法通过这一手段证明C29的特异性。不过至少这一实验证明了BB LOOP区结构对于TLR-1/2的信号传递是至关重要的。3 O" B% d \* ~' B* z, W7 P2 ]* ^' h
接下来作者证明了C29的一类衍生分子，C29L具有相似的效应。/ k4 u3 u6 L% z* w
最后，作者通过体内实验也证明了C29L能够抑制TLR-2生物活性的结论。
