反相柱上样方法
样品在流动相中溶解性不好，是反相柱操作过程中的常见问题。一般说来，可以用以下几种方法解决：
1. 用高浓度甲醇，甚至纯甲醇，来溶解样品。优点是样品溶解完全，缺点是使有效柱长降低。 一般可以在反相柱相对较长时选用该法。
2. 直接用流动相溶解样品。此时样品往往无法溶解完全，超声处理后形成混悬液直按上样。可以适当将上层硅胶轻轻搅起，使其慢慢沉降。其优点是基本不降低有效柱长，缺点是有时偶尔会堵塞柱子（这时只需将上层硅胶轻轻搅起，即可）。我个人倾向于这种方法，分离结果还是令人满意的。此外，由于反相硅胶本身良好的分离效果，也可以用大量低浓度的甲醇充分溶解样品后上样，样品会被反相 硅胶吸附，并不会随流动相冲下来（例如准备用30%甲醇作流动相，可以用20%甲醇大体积溶解样品）。
3. 干法上相。用少量反相硅胶拌相，低温烘干后干法上相（同正相柱）。优点是拌样均匀，分离效果好。缺点是损伤硅胶，成本较高，且操作相对烦琐。不过一般可以收集一些废旧反相硅胶，专门用来拌样；柱子跑完后将上层硅胶刮起，可以反复使用。一般在第二种方法上样后，样品分离效果不能满意的情况下，可以考虑使用本方法。
以上是反相上样常用的三种方法，我个人一般选用第二种方法，即混悬上样。
此外，样品上过一遍反相柱后，再次上柱时溶解度会好很多。主要是由于小极性的杂点，和一些色素类物质已基本除去。这提示我们反相柱上相时一般难溶的，往往是一些小极性的杂点，和一些色素类物质。实际上，化合物纯化工作完成后，你会发现，它一般在流动相中还是比较好溶的。呵呵。
