我在设计一个荧光分光光度分析的实验:一个标本内有两种物质,一种是自带红色荧光的物质:激发波长620nm,发射波长680nm。另一种是FITC标记的物质,带绿色荧光:激发波长485nm,发射波长520nm,请问在同一个标本里,分别检测这两种物质的含量,可不可以?会不会有相互干扰,影响大吗?
附实验方法:快速切取目的组织,样品称重后,置入盛有50%三氯乙酸(Trichloroacetic Acid,TCA)溶液1.5ml的匀浆器中匀浆,匀浆液体用50%TCA稀释至10ml,倒入15ml离心管中,调节转速10000rpm,温度4℃,离心20分钟。取上清液1.0ml,加入1.5ml混合液(50%TCA和无水乙醇按1:3的比例配制而成),充分混匀。应用荧光分光光度(物质A:激发波长620nm,发射波长680nm,FITC标记的物质B:激发波长485nm,发射波长520nm)测定荧光值。校零标准品为50%TCA与无水乙醇按1:3比例配制,用校零标准品配制不同浓度的物质A溶液(0.1-5μg /ml)和物质B溶液(0.1-4μg /ml),测定其荧光值,绘制药物浓度与荧光值之间的标准曲线。依据所测得的荧光值求得组织内物质A和物质B含量。
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