管理提醒： 本帖被 老红 执行提前操作(2012-07-07)
做了这么长时间的有关蛋白的实验，突然想写写实验心得，来和各位生物领域的朋友做个交流。今天就主要讲讲镍柱吧。
说起镍柱，那我得从蛋白纯化方法开始讲了。蛋白纯化方法有很多，像亲和层析，蛋白沉淀，缓冲液更换，离子交换色谱，疏水作用，排阻层析，电泳等。各种方法各有优缺点，而且一些是配合着一起用。这里就该重点突出一下近30年来发展起来的金属螯合亲和层析分离技术，它基于目的蛋白与固相化的配基特异性结合而滞留，其他杂蛋白会流过柱子。而其中选用最广的是His-Tag标签蛋白，这是因为采用固定化金属离子亲和层析纯化His-Tag融合蛋白操作简便；N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制****************容，有利于蛋白表达；His-Tag非常小，不会改变目的蛋白自身的可溶性，相反一些大的标签蛋白如MBP，会大大提高融合蛋白的可溶性，尽管目的蛋白本身是不可溶或者折叠不正确；His-Tag非常小，在融合蛋白结晶后对蛋白结构没有影响等。
既然His-tag在实验中有如此的优势，那么His-tag亲和层析填料就不容被忽视。Hia-Tag可与多种金属离子发生特殊的相互作用，其中镍离子是使用最广泛的。镍琼脂糖凝胶配基经典的是IDA，Ni-IDA螯合了三价，剩余三价，后来做Ni-NTA琼脂糖凝胶，因为它是螯合了四价，剩余是两价，所以在相同条件下洗杂质和目标蛋白的咪唑浓度Ni-TNA的要低，并且NTA的填料更稳定，能耐受更强的还原剂。当然IDA的载量要比NTA高些，但考虑到做蛋白纯化实验的话，主要是能得到更佳是实验结果，载量大小不是主要考虑因素，所以我更倾向于用NTA的填料来做。
目前德国的Qiagen的镍柱是公认很不错的，能说它唯一的缺点就是太贵了。因为有着镍柱做实验的需求，所以想试试看国内研发的一些镍柱。做了一些，效果总是没有Qiagen理想，不禁想，国内就真没有和世界知名品牌相媲美的生物产品吗？其实想想目前怎么说也是国泰民安，国家对生物领域的投入力度也更一步加大，再加上大量的科研人员和归国人员，理论上在中国能够形成大气候，不是现在也该快了。巧，我的这种想法很快被证实了，偶然间，实验室用了七海生物的镍柱，从实验结果看，七海镍柱产品质量和之前用Qiagen镍柱的一致。再加上又是国产的，价格公道，所以好感度又增加了不少。秉着在生物领域对专业的敏感度，我特地网上查了查七海生物的背景，看完他们的信息，也就明白为什么他们能做出这样好的产品了。同时也学习到上学时老师常教导的立大志背后的含义和付出，瞬时觉得做人这辈子有多长多短，有意义没意义的不就在这心态和过程吗？
