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近期,军事医学科学院疾病预防控制所研究人员发表论文,旨在克隆H7N9禽流感病毒M1并在原核细胞中表达,为进一步研究其生物学特性、免疫学功能及血清学检测奠定基础。研究指出,成功克隆了禽流感H7N9病毒的M1基因,并在E.coli中得以表达。该文发表在2015年第03期《预防医学杂志》上。
用PCR方法从禽流感上海分离株A/Shanghai/4664T/2013(H7N9)cDNA扩增M1基因,并克隆到载体pMD18-T中。经测序证实后,用EcoRⅠ/NdeⅠ双酶切,亚克隆到原核表达载体pET28a,并转化E.coli BL21(DE3)菌株。取工程菌,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定及western blot检验。
(1)经PCR、测序和酶切鉴定,成功克隆了禽流感H7N9 M1基因;(2)经IPTG诱导的重组质粒pET28a-M1表达出约为28 k Da的融合蛋白,与预期结果相符;(3)对H7N9型禽流感M1基因序列分析表明,与2013年暴发的H7N9型禽流感病毒M1基因核苷酸序列同源性在95.4%~100%,与2006-2011年间暴发的H7N9型流感病毒M1基因序列同源性在69.0%~89.6%,2013年感染人的H7N9型流感病毒与此前暴发的该型流感分离株属于不同的进化分支。
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